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本制品主要适用于动物原生代或培养细胞的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。


茜素红S是一种蒽醌衍生物：9,10-二氢-3,4-二羟基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸单钠盐，又称媒介红3(Mordant Red 3)或茜素磺酸钠。其分子式为C14H7NaO7S，分子量为342.25。茜素红和钙离子以鳌和方式形成复合物，用以识别组织细胞的钙盐成分。钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过茜红素染色，产生桔红色沉积，但会受到其它金属元素的干扰。

组分	规格
茜素红S染色液(pH8.3)	10mL
说明书	1份

保存：2～8℃，避光，有效期1年。


以6孔板为例，每孔孵育的染色工作液为500μL，本试剂盒可以做20个样本；以普通切片和96孔细胞为例，每张玻片孵育的染色工作液为100μL，本试剂盒可以做100个样本。


显微镜、载玻片、盖玻片、无水酒精、二甲苯、中性树胶、亮绿复染液、70%乙醇固定液(不含钙)。

1. 样本处理
   
   1. 6孔板培养细胞爬片：
      去除培养基，1×PBS(pH7.2，不含钙镁)洗涤细胞爬片2次，70%乙醇室温固定细胞60min，去除固定液，1×PBS(pH7.2，不含钙镁)洗涤细胞爬片2次后待用。
      注意：本步骤的固定液也可用4%多聚甲醛来替代，室温15～30min。
      
   2. 冰冻切片：
      冰冻切片，室温平衡，1×PBS(pH7.2，不含钙镁)洗涤2次，待用。100%甲醇固定1～2分钟。
      
   3. 石蜡切片：
      ① 脱蜡：二甲苯中脱蜡5～10分钟。再换用新鲜的二甲苯，脱蜡5～10分钟。
      ② 梯度入水：95%、70%、30%乙醇各2分钟，蒸馏水2分钟。
2. 染色步骤
   
   1. 茜素红S染色
      ① 以茜素红染色液覆盖样本，37℃避光孵育至少60分钟。(如果颜色偏淡，可以适当延长时间。)
      ② 取出染色玻片，双蒸水缓慢冲洗玻片3～5分钟。
      注意：细胞爬片样本建议多用1×PBS，pH7.2，不含钙镁洗涤5次，每次2min，直接显微镜拍照观察。
      
   2. 亮绿染色(组织样本可选步骤)
      滴加1～2滴亮绿染色液覆盖样本，染色20～30s。
      
   3. 分化透明处理、分化透明处理(组织样本可选步骤)
      ① 盐酸-酒精分化液每片100μL覆盖样本10s后去除。
      ② 无水酒精脱水，二甲苯透明。
      ③ 封片剂封片后，显微镜观察，拍照。
3. 染色结果
   钙沉积阳性细胞呈现桔红色；
   胞浆及胶原纤维呈现绿色(可选)。

相关搜索：茜素红S染色液(pH8.3)，Alizarin Red S Staining Solution